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斑点杂交、反向斑点印记杂交和荧光原位杂交

日期:2012-05-12   来源:   阅读数:4371

    据www.qgyyzs.net小编了解,斑点杂交是将从患者身上取下的dna样品变性成单链或者获取rna,直接点在硝酸纤维素滤膜上,加入过量的核酸探针固相分子杂交,依据杂交信号的强度检测目的基因的存在与否和拷贝情况。斑点杂交这种方法不但经济,而且简便和快捷,已经广泛应用于基因表达分析和基因诊断。杂交斑点适用于诊断基因缺失的遗传疾病,如地中海贫血症的诊断。但是这种方法也有着特异性差和假阳性的缺点。

    反向斑点印记杂交主要是针对一种疾病有多个突变类型,将各种突变类型的不同等位基因的特异性寡核苷酸探针点在固相支持膜上,与受标记的患者dna样本杂交。探针合成后,在其3’端使用末端转移酶添加400bp的dt尾巴,并使其与尼龙膜表面的氨基反应结合在膜上。其缺点是无法检出未知的dna序列和突变类型。

    荧光原位杂交是在放射性原位杂交的基础上发展起来的,通过荧光信号显示检测结果。荧光标记的dna探针与待测dna进行原位杂交,使用荧光显微镜对荧光信号检测。这种方法在基因定位、基因缺失的检测、遗传病的分型以及染色体水平上的研究检测很重要,在临床上也被应用于病毒的检测、肿瘤诊断等。近些年又发展出了一系列精确度更高的技术,如多色荧光原位杂交技术。