基因组文库与cDNA文库
日期:2012-07-21 来源: 阅读数:1886
据www.qgyyzs.net小编了解,基因组文库的构建和cdna文库的构建在基因工程中,有着非常重要的意义,往往作为工程菌目的dna的来源。
使用限制性内切酶酶切整个细胞的基因组dna,得到大量的基因组dna片段,后将这些dna片段与适当的载体进行连接形成重组体分子。将这些重组体分子转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样一个克隆内的每个细胞的载体上都包含着特定的基因组dna片段,这样的一套克隆称为基因组克隆。而包含了所有转化子的克隆的集合称为基因组文库。使用λ噬菌体构建基因组文库的基本步骤为:准备载体dna,用适当的限制酶消化,分离得到载体的左右两臂;纯化真核细胞dna,用适当的限制酶部分消化;分离适当大小的基因组dna片段,约20-24kb;连接载体与外源dna;连接产物体外包装及感染;最后一步是基因组文库的扩增。由于基因组文库包含着染色体所有随机片段,形成重组dna,利用一定筛选方法,筛选出所需目的基因片段的重组克隆。
cdna是指以mrna为模板,在逆转录酶的作用下形成互补dna。以细胞全部的mrna逆转录合成的cdna组成的重组克隆群体成为cdna文库。主要步骤分为:mrna分离;cdna第一链的合成;cdna第二链合成;载体与cdna连接;噬菌体的包装与转染;目的cdna克隆的筛选。从cdna文库中筛选目的cdna的方法通常有两种,即核酸杂交法和特异抗原的免疫学检测法。
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