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基因工程生产生物药物中常用的基因克隆载体

日期:2012-07-22   来源:   阅读数:1906

    据www.qgyyzs.net小编了解,在基因工程生产生物药物中常用到的基因克隆的载体常有四种,它们分别为质粒载体、λ噬菌体载体、粘粒载体、pbluescr1pt噬菌粒载体。

    质粒载体常具有一下特点:分子相对较小,常在3-10kb之间;松弛型复制;具有适当的多克隆位点以便于外源dna插入;具有插入失活筛选标志,便于从平板上直接筛选到阳性重组子;质粒能够携带的外源dna片段一般很小。这一类质粒载体常用的两种为pbr322载体和puc载体。pbr322载体具有较小的相对分子质量易于纯化,操作起来更加方便,同时具有两种抗生素抗性基因便于用作筛选子筛选的选择标记,同时具有很高的拷贝数,经过氯霉素扩增后可达到一千到三千个拷贝,为重组体的纯化带来了方便。puc质粒载体具有更小的相对分子质量和更高的拷贝数,同时还可以用组织化学的方法进行重组体的检测。puc8质粒结构中具有来自于大肠杆菌lac操纵子的lacz基因,所编码的α-肽可以参加α-肽互补作用,用x-gal显色法实现对重组体转化子的鉴定。

    λ噬菌体载体分为两种置换型载体和插入型载体,前者适用于构建基因组dna文库,后者适用于构建cdna文库。粘粒载体常含有抗药性标记和复制起始位点,带有λ噬菌体载体的粘性末端。pbluescr1pt噬菌粒载体在多克隆位点区两侧存在一对t3和t7噬菌体的启动子,用以定向插入在多克隆位点上外源基因的转录活动。